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  •   葡聚糖凝胶(Sephadex)是白色珠状颗粒,由葡聚糖经醚键相互交联聚合而成具有多孔性三度空间网状结构的高分子分离材料,为稳定的亲水性凝胶,在水中和电解质中很容易溶胀。不同型号的葡聚糖用英文字母 G 表示,如 G-25,G-75 等,新濠国际娱乐G 后面的数字除以 10 为该凝胶每克干重所吸收水的毫升数。能使一定分子范围的大分子进入凝胶的网状结构内。溶胀程度不同,分离分级范围也不同。具体产品的分离范围及应用如下:

      化学稳定性:葡聚糖那不溶于一切溶剂(除非它被水解),在水、盐溶液、有机溶剂、碱和

      弱酸性溶液中都有很好的稳定性,在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。长期接触氧化剂容易

      破坏凝胶,所以应该避免使用。在湿空气中易长霉,可用氯、甲苯、叠氮钠做防腐剂。

      物理稳定性:葡聚糖凝胶并不熔融,可以在湿态、中性 pH 进行灭菌或者高压灭菌 120C,

      30 分钟不影响它的色谱性质。干态的凝胶加热至 120C 以上开始焦糖化。

      在凝胶使用前,首先将其溶胀,具体方法:室温下,将干粉浸泡在超纯水中充分溶胀 24 小

      时,并不断搅拌保证凝胶 充分溶胀;或者在室温下,将干粉浸泡在 50-60%乙醇中至少 24

      将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性注入柱内,注意要避免柱内产生气泡或者断层,保持湿态装柱,可在凝胶可承受的操作压下装柱,保证装柱均匀,装完柱可以检测柱效,检查凝胶装填是否合格。

      凝胶过滤的上样量一般为 5%的柱床体积,初次上样建议控制在 1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到 20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在 40-50cm 以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为 5:1 即可

      可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱 Buffer 中加入 NaCl 等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;

      凝胶使用十次后作一次 CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以 40cm/h

      凝胶使用完后,可将其回收,可将凝胶用超纯水冲洗干净并滤干,加入 0.02%的叠氮钠做为防腐剂,或者浸泡在 20%的乙醇中,防止长菌。

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